水中细菌总数的测定 

细菌总数测定是测定水中需氧菌、兼性厌氧菌和异养菌的总数。本实验以1毫升水样在营养琼脂培养基中，于37摄氏度培养24小时后所生长的细菌菌落的总数，作为水体受细菌污染程度的标志。

工具与材料

培养皿，锥形瓶，移液管，烧杯，恒温箱，高压蒸汽灭菌锅（图3－1－20－1），pH试纸，酒精灯，放大镜。

牛肉浸膏，蛋白胨，琼脂，氯化钠，5％盐酸溶液，4％氢氧化钠溶液。

活动过程

1．采集水样。

采集瓶预先在高压蒸汽灭菌锅内灭菌2小时，然后按《水样的采集和保存》介绍的方法，采集2升水样，盖好瓶盖保存。

2．培养基的配制。

称取3克牛肉浸膏、10克蛋白胨、5克氯化钠、20克琼脂，加入到1升蒸馏水中，加热、搅拌使之溶解，用盐酸和氢氧化钠将溶液pH值调节为7.0～7.2。

3．灭菌。

将培养基、培养皿、锥形瓶、烧杯、移液管等放入高压蒸汽灭菌锅内，灭菌20分钟。

4．细菌总数的测定。

在点燃的酒精灯旁，用灭过菌的移液管吸取1毫升待测水样，注入已灭菌的培养皿中，再注入约15毫升温度约45摄氏度的液态培养基，旋摇培养皿，使水样与培养基充分混合。同时做一个平行样本。待培养基冷却凝固后，翻转培养皿，使底面向上，置于37摄氏度恒温箱内培养24小时。取出后用放大镜观察，统计菌落数。

5．将两个培养皿中菌落数平均一下，计算1毫升水样中的细菌总数。

说明与延伸

1．若检测自来水水样，应先将水龙头用火焰灼烧3分钟灭菌，然后打开水龙头，让水流出5分钟后取水样。

2．计数时，对那些看来相似、距离很近但不相触的菌落，应一一计数。那些紧密接触而外观相异的菌落，也应一一计数。

3．培养基上的菌落数超过300时，要对原水样进行稀释。结果要以测出菌落数乘以稀释倍数。

4．水样采集后，应立即检验。如果放置时间过长，检验结果比实际值偏大。

5．使用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌时，注意安全，以免被蒸汽灼伤。