水中大肠杆菌群数的测定

粪便中存在大肠杆菌，故测定水中的大肠杆菌群数，可检验水体是否被粪便污染以及污染的程度。

本实验用发酵法测定大肠杆菌群数。依据原理是：大肠杆菌群在37摄氏度生长时使乳糖发酵，其产物在特定培养基上形成黑色化合物。统计染成黑色的菌群数，即可计算水中大肠杆菌群的数量。

工具与材料

高压蒸汽灭菌锅，恒温培养箱，生物显微镜（图3－1－21－1），载玻片，培养皿，移液管，抽滤瓶，布氏漏斗，醋酸纤维素滤膜，镊子，酒精灯，锥形瓶。

蛋白胨，乳糖，磷酸氢二钾，琼脂，2％伊红溶液， 0.5％美蓝溶液，5％盐酸溶液，5％氢氧化钠溶液。

活动过程

1．培养基的配制。

称取20克琼脂，加入到900毫升蒸馏水中，加热溶解，然后加入2克磷酸氢二钾、10克蛋白胨，搅拌使之充分混合，补充蒸馏水至1000毫升，用盐酸和氢氧化钠溶液调节pH值为7.2～7.4。再加入10克乳糖，混匀后分

装在250毫升的锥形瓶中，在121摄氏度的高温蒸汽灭菌锅内灭菌15分钟，贮于冷暗处备用。

2．灭菌。

将培养皿、漏斗、滤膜、抽滤瓶、吸管等放入高压蒸汽灭菌锅内灭菌20分钟。

3．平板培养基的制作。

将贮备的培养基加热融化，用已灭菌的吸管加入5毫升伊红溶液和5毫升美蓝溶液，并充分混匀。立即将约15毫升培养基倾入已灭菌的空培养皿中，冷凝待用。

4．将布氏漏斗在抽滤瓶上固定好，用无菌镊子夹取醋酸纤维素滤膜边缘，粗糙面朝上，贴放在布氏漏斗上。

5．把采集的水样1000毫升倒入布氏漏斗中，将抽滤装置（图3－1－21－2）中的缓冲瓶连上抽气装置，进行抽滤。

6．抽滤结束后，用镊子将附有细菌的滤膜小心取出，放在培养皿中的培养基上，使滤膜与培养基完全紧贴。

7．将培养皿置于37摄氏度恒温箱内培养24小时，取出后统计培养基上呈黑色的菌群数，填入表3－1－21－1。

说明与延伸

1．整个实验过程必须在无菌状态下操作。

2．培养基的配制可预先由实验室完成，学生可不做这一部分。

表3－1－21－1  水体大肠杆菌群数测定报告

3．每个培养皿内以出现30～300个菌群为准，若超过300个，水样应进行稀释。结果应以统计出的菌群数乘以稀释倍数。

4．采集水样时采样容器必须充分灭菌。

5．国家标准规定，饮用水中总大肠杆菌群必须小于10000个／升。观察自来水是否达到饮用水标准。